柱色谱法

柱色谱法

用于柱色谱的自动组分收集器及取样器

常见的制备性色谱柱是直径5mm至50mm的管状玻璃仪器,高5mm至1m,底部有旋塞,柱体底部间通常塞有多孔玻璃块或玻璃纤维以支撑填料。色谱柱的装填主要有两种方法:

干法装填。首先往柱体装入干燥的固定相粉末,然后自顶部加入流动相溶剂,冲洗直至整个固定相被溶剂浸没。

湿法装填。首先将固定相和流动相溶剂混合制成悬浊液,关闭色谱柱旋塞,柱体竖直,均匀地将悬浊液倒入,注意不能产生气泡。倾倒最好一次完成,否则固定相间断层影响分离效果。等待片刻,固定相沉降,有时用塑胶球轻敲柱体帮助固定相堆积密实。装填完成后顶端自然留有一段溶剂。

固定相装填完毕后,通常在其顶端铺上一小层硅藻土、玻璃纤维或棉花等材料,用来保护固定相顶层的形状不被流体搅乱。将液面调节至固定相顶端以上,硅藻土顶端附近,小心滴加含有待分离物质的溶液。溶剂自柱色谱上口补充,同时打开下旋钮开始洗脱。分离过程中必须保持液面在固定相顶端以上,否则将会出现气泡和裂缝。[3]如果发生干柱,吸附在固定相中的产物可能很难冲洗下来,需拆下使用溶剂溶解,造成时间上的消耗和产物上的损失。由于分离时间通常较长,有时在柱顶加上一溶剂球,或装满溶剂的分液漏斗,以保持液面可以持续高于柱顶一段时间,而不必一直在旁值守。

使用一系列按次序编号的锥形瓶或试管等接收溶剂,由于各组分通过固定相速度的差异,流出时间有差别,于是不同组分被分离到不同编号的容器中。通过旋转蒸发等手段浓缩产物。并且,较长时间的柱色谱分离可能耗费大量溶剂,旋蒸过后的溶剂可拿来重复使用。

对于有色物质的分离,可通过流出序列颜色判断产物位置,[4]然而,多数情况需要借助分析性色谱的方法判断。常用的方法例如取一组流出液点板,进行薄层色谱分析,硅胶板置于紫外灯下,从产物荧光判断组分。

柱色谱法的分离步骤

可同时操作数根色谱柱以提高分离效率,多通道收集器可实现区分不同组分的流出液,其原理为通过紫外-可见分光光度法或荧光光谱监控流出液的组分。已有快速制备色谱仪实现自动化的分离和组分检测。[2]

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